蛋白分析FAQ彙總

• • 提豆醬多肽裏面還有食鹽，需要脫鹽嗎？怎麼脫呢？

  從豆醬提取的多肽中如果含有食鹽，通常情況下是需要脫鹽的。這是因爲食鹽（氯化鈉）可能會影響多肽的純度和穩定性，尤其是在用於某些特定的生物學或化學分析時。脫鹽可以通過多種方法進行，主要的脫鹽技術包括： 1.透析法： 這是一種常見的脫鹽方法，通過使用半透膜來分離小分子的鹽和大分子的多肽。透析袋中

• • 做蛋白組分液相分析，溶劑是0.1%TFA，流動相是0.1%TFA與乙腈，但是5min內總是會出現遠遠高於目標峯的峯是爲什麼呀？

  在蛋白質組學的液相色譜分析中，如果在5分鐘內出現遠高於目標峯的峯，這種情況有幾個可能的原因： 1.系統峯或基線漂移： 在分析的初始階段，由於流動相中的溶劑組分與色譜柱的平衡，可能會產生較大的系統峯。特別是在使用含有有機溶劑（如乙腈）和0.1%三氟乙酸（TFA）的流動相時，這種現象更爲常見。

• • wb目的條帶連成一條，內參正常，可能原因

  如果您的 WB（Western Blot）目的條帶連成一條，但內參正常，可能的原因包括： 1.過度加載樣本： 如果您加載的目標蛋白質樣本過多，它們的條帶可能會連成一條，因此請確保加載適量的樣本。 2.抗體親和力過強或濃度過高： 使用的一抗或二抗過於親和或濃度設置得過高，導致過度染色。

• • 請問，WB電泳的時候，蛋白的上樣量爲什麼是20ug-30ug，蛋白量過多過少會怎麼樣？蛋白上樣量是與WB的測定目的有關嗎？

  Western Blot（WB）實驗中，蛋白的上樣量通常建議在20μg-30μg之間，因爲這個量級通常能保證足夠的蛋白量以獲得清晰的條帶，同時又不至於過多導致信號飽和或條帶模糊。如果蛋白量過多，可能導致信號過強、條帶模糊，甚至可能出現條帶堆積的現象；如果蛋白量過少

• • western blot 分離膠對應的濃度與蛋白大小（KD）的關係是怎麼樣的呢

  Western blot中，分離膠的濃度與蛋白質大小（kDa）的關係基本上是：分離膠的濃度越高，其分離的蛋白質分子量範圍越小。具體來說： 1.低濃度的膠（比如5%）更適合分離大分子量的蛋白質（比如大於200 kDa）。 2.中等濃度的膠（比如10%-12%）通常用於分離中等分子量範圍的蛋

• • 轉膜過程前，爲什麼需要用轉膜緩衝液浸泡膜啊？

  在轉膜過程中使用轉膜緩衝液浸泡膜是出於幾個關鍵原因： 1.膜的活化： 某些膜材料，如硝酸纖維素或聚偏氟乙烯（PVDF），需要通過緩衝液活化以提高其親和力，確保蛋白質有效地從凝膠轉移到膜上。 2.防止乾燥： 保持膜的溼潤狀態防止在轉膜過程中乾燥，乾燥的膜可能導致蛋白質轉移不均勻或效率降低。

• • WB出現過曝光的條帶是爲什麼？有什麼解決辦法嗎？

  Western blot出現過曝光的條帶通常是由於曝光時間過長或者抗體濃度太高所導致。解決這個問題的辦法包括： 1.調整曝光時間： 減少曝光時間，尤其是在使用化學發光檢測系統時。 2.優化抗體濃度： 降低一抗或二抗的濃度。 3.洗滌步驟： 增加膜的洗滌次數或時間，以減少非特異性結合。

• • WB電泳樣品孔中加樣量一般是多少，這是根據什麼來設定的，過多或過少又會導致什麼後果誒

  免疫印跡(Western Blot, WB)電泳中樣品孔加樣量的確定取決於幾個因素，主要包括凝膠的尺寸、孔的容積、樣品的濃度和所需檢測的蛋白質的丰度。通常，加樣量範圍在10到30微升之間。 如果加樣量過多，可能會導致以下後果： 1.樣品溢出： 樣品可能會從一個孔溢出到相鄰的孔，導致結果混

• • 目前已經用His標籤純化了目的蛋白A。做Co:Ip時，可不可以用myc標籤純化另一個蛋白，然後做co,ip實驗？

  可以的。使用His標籤純化目的蛋白A之後，您完全可以使用Myc標籤來純化另一個蛋白，然後進行共免疫沉澱（Co-IP）實驗。這種方法允許您特異性地識別和純化兩種不同的蛋白，從而使得Co-IP實驗更加精確和可靠。在實驗中，您可以用抗Myc抗體捕獲Myc標籤蛋白，然後檢測是否有His標籤的蛋白A與

• • 蛋白組學檢測到的差異蛋白爲什麼western blot檢測不到？

  蛋白組學通過質譜等技術檢測到的差異蛋白在Western Blot中檢測不到可能有幾個原因： 1.檢測靈敏度不同： 質譜等蛋白組學方法通常比Western Blot更敏感，能檢測到低丰度的蛋白。 2.靶蛋白特異性： Western Blot依賴特異性抗體識別目標蛋白，如果抗體對該蛋白的識別