做蛋白組分液相分析,溶劑是0.1%TFA,流動相是0.1%TFA與乙腈,但是5min內總是會出現遠遠高於目標峯的峯是爲什麼呀?
在蛋白質組學的液相色譜分析中,如果在5分鐘內出現遠高於目標峰的峰,這種情況有幾個可能的原因:
1.系統峰或基線漂移:
在分析的初始階段,由於流動相中的溶劑組分與色譜柱的平衡,可能會產生較大的系統峰。特別是在使用含有有機溶劑(如乙腈)和0.1%三氟乙酸(TFA)的流動相時,這種現象更為常見。
2.樣品中的雜質:
如果樣品處理不當,可能含有雜質,如鹽類或其他小分子,這些雜質會在分析的早期階段首先被洗脫出來,形成較大的峰。
3.溶劑不匹配:
如果樣品的溶解溶劑與流動相的組成不匹配,可能會在初始階段產生溶劑效應,導致突出的峰出現。
4.溶劑和樣品的注入體積:
過大的樣品注入量或不適當的溶劑體積也可能導致初始峰的出現。
5.色譜柱平衡不充分:
在分析之前,如果色譜柱沒有充分平衡至穩定狀態,也可能出現異常峰。
如果用有機系濾膜過濾樣品之後溶劑峰會明顯降低,說明樣品中的含有大量的雜質,此時可以對樣品進行淨化,確保樣品中不含高濃度的鹽或其他小分子雜質。
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