完整糖基化分析

蛋白質糖基化是指糖基轉移酶作用下，糖類化合物與蛋白質上的氨基酸殘基形成糖苷鍵，將糖類化合物連線到蛋白質的過程。該過程從內質網開始，經過一系列修飾作用，最終在高爾基體完成。經過糖基化修飾的蛋白質被稱為糖蛋白。

糖基化對生物製品的療效、穩定性和免疫原性具有重要影響。寡糖譜和糖鏈結構是評估生物製品特性的重要指標。寡糖參與蛋白質摺疊、訊號傳導等細胞過程，與蛋白質結合形成糖蛋白。糖蛋白常位於細胞表面，參與細菌、病毒的識別和凝集素等蛋白質的相互作用，對生物製品的正常功能至關重要。

寡糖的非模板合成和樹狀結構使得其結構解析變得困難。為解決這一問題，百泰派克生物科技BTP開發了一系列穩定且高效的液相色譜高分辨質譜（LC-MS/MS）表徵方法。這些方法涵蓋了從糖鏈分析到糖基化位點鑑定，再到糖肽解析的完整分析流程，能夠準確分析寡糖的結構，為糖基化研究提供了強大的工具和技術支援。以下是基本流程圖：

圖1糖基化分析流程圖

生物製品完整糖基化分析

糖基化肽段是指糖鏈連線在肽段上的形式，包含了肽段的氨基酸資訊、完整的糖鏈資訊以及糖鏈和肽段結合位點的資訊。爲了實現對特定糖蛋白完整意義上的糖基化分析，百泰派克生物科技BTP基於液質聯用的高分辨質譜平臺開發了相應的分析方法。透過這些方法，我們可以獲取以下資訊：

• 糖基化位點的定位，即蛋白質中哪些位點發生了糖基化修飾；

• 區分N糖基化位點和O糖基化位點，以確定糖鏈修飾的型別；

• 獲取每個N糖基化位點對應的糖鏈組成、結構和相對含量資訊；

• 獲取每個O糖基化位點對應的糖鏈組成和相對含量資訊；

• 對上述資訊進行統計和總結，以便進一步分析和解釋糖蛋白的糖基化特徵。

這些分析結果將有助於我們深入瞭解糖蛋白的糖基化修飾情況，為研究糖蛋白的功能和生物學意義提供重要的資訊。

實驗儀器

• NanoLC: Vanquish NEO

• MS: Orbitrap Fusion Lumos With ETD

實驗結果展示

1.糖基化修飾類別

表1 糖基化修飾型別統計

注：Type：糖基化修飾型別；Position：糖基化位點在蛋白中的位置；Glycans NHFAGNa：糖基化修飾的糖型；Modification Type(s)：糖型的分子量；Score：蛋白打分值；Intensity：蛋白的相對丰度；Percentage %：該種糖型在各自對應的位點的總糖型中所佔的比例。

2.糖基化位點修飾效率

圖2 糖基化效率統計圖

注：糖基化效率（%）= * 100

3.每一個糖基化位點各種糖型比例

圖3 糖型比例

注：圖中為某一位點含有的N糖糖型和佔比，橫座標為糖型，縱座標為糖型的佔比

4.蛋白糖基化修飾資訊彙總圖

圖4 糖基化資訊彙總

注：圖中為每個位點上含量前三的糖

完整糖基化分析

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