自由巰基定量
自由巰基是半胱氨酸中的硫原子形成的一種特殊結構。自由巰基非常活潑,可以與其他蛋白質結合而改變其結構和功能,也可以與氧分子反應產生氧化物損害細胞和組織。自由巰基定量是抗體等蛋白質類生物製品的一個重要檢測專案。例如,含有自由巰基的抗體的生物學功能有時比完整抗體會有所下降,甚至差距很大。因此,快速響應並精確定量蛋白質類生物製品中的自由巰基,對產品的早期工藝開發和後期生產監控都至關重要。
自由巰基定量
巰基和二硫鍵往往以活性基團形式參與酶催化、輔助因子結合以及蛋白質活性構象的維持。自由巰基含量對蛋白的性質和存在方式有很大關係,是生物製藥過程中質量檢測的重要環節。
Ellman法是檢測自由巰基濃度的常規方法,原理為DTNB試劑與遊離巰基反應生成2-硝基-5-硫代苯甲酸(TNB-),若在中性或鹼性pH條件下的水中可以離子化,生成TNB2-二價陰離子。這種TNB2-離子呈現黃色,透過測定在412nm可見光吸光度就可以定量TNB2-,然後可以用半胱氨酸標準品定量巰基或者基於摩爾吸收率定量巰基的方法對自由巰基進行定量。
百泰派克生物科技BTP基於CNAS/ISO9001雙重質量認證體系建立七大檢測平臺,其中自由巰基含量檢測平臺,透過CNAS認證,具有完整的方法學開發和轉讓能力。BTP還提供其他生物製品表徵 相關的服務,可點選瞭解。
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