GST pull-down蛋白相互作用分析

標準的pull-down分析需要帶有重組親和標籤的純化蛋白，該標籤具有“誘餌”的功能，並固定在標籤特異性親和配體上。然後將另一種蛋白質或“獵物”蛋白質與“誘餌”蛋白質一起孵育。當這兩種蛋白質發生物理相互作用時，“獵物”蛋白質將被“誘餌”蛋白質捕獲。之後，取決於親和配體，可以使用洗脫緩衝液洗脫相互作用的“獵物”蛋白。最後，“獵物”和“誘餌”蛋白都可以透過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離，然後對凝膠染色透過蛋白質印跡法進行檢測。

GST pull-down融合蛋白沉降技術，利用基因重組將帶有GST標籤的載體插入到目標蛋白A上，谷胱甘肽包裹的磁珠與目標融合蛋白結合，加入細胞裂解液後，具有相互作用的蛋白被融合蛋白吸附，加入過量的谷胱甘肽進行洗脫，洗脫後的樣品透過質譜分析法對樣品進行分析鑑定。GST pull-down融合蛋白沉降技術蛋白相互作用分析主要是研究體外強烈或者穩定的蛋白質間相互作用；可以鑑定兩種已知的感興趣蛋白質可能存在的直接相互作用；尋找可能與目標蛋白存在相互作用關係的未知蛋白。

除了確認蛋白質之間的相互作用外，GST pull-down融合蛋白沉降技術蛋白互作分析法還可用於表徵蛋白相互作用的條件。例如，使用蛋白質結構域截短法進行pull-down法可以對蛋白質相互作用至關重要的功能區域進行確定。此外，GST pull-down融合蛋白沉降技術蛋白相互作用分析法還可用於探索目的蛋白質相互作用的伴侶，將“誘餌”蛋白與混合蛋白溶液或細胞/組織提取物一起孵育。洗滌步驟後，可以透過高通量方法洗脫並對結合的蛋白質進行質譜鑑定。

*百泰派克提供基於質譜的pull-down樣品蛋白質譜鑑定，詳情參見：基於質譜的互作蛋白質譜分析方法







Pull-down互作蛋白質分析流程


作為領先的組學技術服務公司，百泰派克生物科技在基於質譜的蛋白互作分析方面擁有多年經驗。百泰派克提供蛋白表達和純化的高效策略，以及用於pull-down蛋白互作分析的最優最佳化方案。我們以嚴格的質量控制和較短的檢測週期為特色，百泰派克生物科技為節省您的寶貴時間和預算，向客戶提供可定製的一站式服務，涵蓋您專案中從基因合成到資料包告的每個步驟：
• 基因合成，表達質粒構建-誘餌蛋白的表達，純化和固定化-獵物蛋白的表達和純化-孵育，洗滌和洗脫
• 透過SDS-PAGE, Western對蛋白相互作用進行鑑定
• LC-MS質譜鑑定相互作用蛋白-資料分析-出具中英文報告-免費諮詢

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