蛋白質免疫印跡和電轉移服務

電泳分離的蛋白質從凝膠基質轉移或“印跡”到膜（通常是硝酸纖維素或PVDF）上，然後在膜表面進行基於抗體的後續檢測，稱為蛋白質免疫印跡（Western Blot或immunoblotting）。百泰派克生物科技提供蛋白質免疫印跡分析服務，蛋白質免疫印跡法透過高選擇性和高敏感的抗體-抗原相互作用，可用於從複雜蛋白質混合物中檢測特定的目標蛋白質，例如組織勻漿或細胞提取物等。所得資料可用於對目標蛋白質進行定性和半定量分析。



電轉移一般流程圖




蛋白免疫印跡是一種廣泛使用的蛋白質分析技術，可用於檢測組織勻漿或提取物樣品中的特定蛋白質。蛋白免疫印跡法使用凝膠電泳法分別透過3-D結構和多肽鏈的長度對天然蛋白質及變性蛋白質進行分離，分離後的蛋白質被轉移到膜（通常是硝酸纖維素膜或PVDF）上，最後在膜上用對目標蛋白質具有特異性的抗體進行特異性識別。Western Blot廣泛應用於分子生物學、生物化學、免疫遺傳學和其他分子生物學領域。

在蛋白免疫印跡分析中，首先利用各種方法，如SDS-PAGE和IEF，透過等電點（pI）、分子量、電荷或這些因素的組合，從凝膠電泳中分離出樣品中的蛋白質。常用SDS-PAGE進行分離，因為所有蛋白質都被溶解在凝膠內，沿相同方向遷移，結合SDS的變性作用，抗原表位更容易被識別。

凝膠電泳分析之後，將蛋白質從凝膠轉移至由硝酸纖維素或聚偏二氟乙烯（PVDF）製成的膜上，以用於抗體檢測。PVDF膜與蛋白質的結合能力比硝酸纖維素膜更高，但硝酸纖維素膜與較小蛋白質結合的更好。轉移蛋白質的主要方法是電印跡，電印跡法使用電流將蛋白質從凝膠中拉入PVDF或硝酸纖維素膜中。電泳轉移方法包括：溼法轉印、半乾轉印和半溼轉印。如果使用等電點聚焦進行蛋白質分離，那麼利用壓力轉印擴散來轉移蛋白質更為有效。

轉印過程從一個小時（半乾轉印）到過夜轉印（溼法轉印），時間不等。轉印完成後，膜的自由結合位點被蛋白質混合物封閉，因此後續抗體檢測不會受到干擾。即可對轉印到膜上的蛋白質進行抗體檢測。包含蛋白質的膜首先與一抗進行孵育，然後再由識別一抗的二抗結合後進行檢測。二抗一般帶有報告基團，並具有很高的靈敏度。

最靈敏的檢測方法是使用增強化學發光（ECL）：透過抗體-辣根結合物對一抗進行識別。使用增強化學發光的特殊變體，可檢測低至1 pg的蛋白條帶。

蛋白免疫印跡還可用於追蹤蛋白質的磷酸化，與磷酸化蛋白質的所有亞型相結合的抗體會在二維凝膠上呈現“念珠狀”外觀。也可用於鑑定免疫共沉澱產生的複合物中的已知蛋白和未知蛋白，只要目標蛋白質在凝膠中，就可以透過考馬斯亮藍染色，從凝膠中切出相應的斑點，進行後續質譜鑑定。