脂質代謝組學研究中,組織提取脂質的辦法?
- 收集組織樣本:確保樣本新鮮,並迅速將其冷凍以防脂質氧化。
- 稱重:精確記錄樣本的重量,以便後續計算脂質濃度。
- 向樣品中加入甲醇和氯仿的混合溶劑(比例通常為2:1)。
- 徹底混合後,加入氯仿和水,使最終比例達到1:1:0.9(甲醇:氯仿:水)。
- 離心,收集下層含有脂質的氯仿相。
- 使用氯仿和甲醇的混合溶劑(比例為2:1)。
- 新增一定量的0.9%鹽水。
- 離心後,同樣收集下層的氯仿相
在脂質代謝組學研究中,組織提取脂質的常用方法如下:
1.樣品製備:
2.均質化:
使用均質器(如珠磨機、超聲破碎機等)在冷卻條件下將組織樣本均質化,以釋放細胞內的脂質。
3.脂質提取:
Bligh和Dyer方法適用於小樣本量。
Folch方法:適用於較大樣本量:
4.清洗:
可以透過加入一定比例的鹽水,再次離心來清洗,去除上層水相中的非脂質雜質
5.脂質濃縮:
使用旋轉蒸發器或氮吹儀在低溫下蒸發掉溶劑,留下純淨的脂質。
6.溶劑蒸發:
在氮氣下或真空乾燥機中蒸發溶劑,留下純脂質。
7.脂質重懸:
將提取得到的脂質重懸在適當的溶劑中(如氯仿),以備後續分析。
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