Edman降解:蛋白質和肽段的氨基酸序列鑑定方法
Edman降解是一種用於順序確定多肽(如蛋白質和肽段)N-末端氨基酸序列的化學方法。該方法是由Pehr Edman在20世紀50年代開發的。
圖1.Edman測序反應過程
一、工作原理:
1.反應:
肽或蛋白質首先與Edman試劑(酚異硫氰酸)反應。這導致N-末端的氨基酸與該試劑形成一個穩定的環狀硫化衍生物。
2.解鏈:
接著,透過加熱或使用酸,這個環狀衍生物從肽鏈上斷裂,從而釋放出一個與N-末端氨基酸對應的硫化衍生物。
3.分析:
然後可以透過色譜法或其他分析技術鑑定這個衍生物,從而確定原始肽段或蛋白質的N-末端氨基酸。
4.重複:
對於多於一個氨基酸的肽或蛋白質,此過程可以連續重複,每次識別下一個氨基酸,直到整個序列被確定或降解效率下降為止。
二、優勢與侷限性:
1.優勢:
(1)Edman降解是一種非常特異的方法,對N-末端氨基酸的鑑定非常準確。
(2)與質譜相比,它不需要複雜的儀器。
2.侷限性:
(1)Edman降解的效率隨序列長度的增加而減小。通常,該方法最適合鑑定較短的肽段,例如50個氨基酸以下。
(2)對於某些難以處理的氨基酸或化學修飾,該方法可能不那麼有效。
(2)在一些應用中,質譜法可能更快且更靈敏。
儘管近年來質譜在蛋白質序列分析中的應用逐漸增多,Edman降解仍然是一個重要的工具,特別是對於某些特定的研究問題或應用。
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