膜蛋白鑑定服務

    膜蛋白(如受體和離子通道)是細胞功能的關鍵調節劑。膜蛋白佔已知可藥用靶標的三分之二,可見膜蛋白在生物製藥行業中的重要性。

    其中G蛋白偶聯受體(GPCR)是最大的,用途最廣泛的膜受體類蛋白,也是最重要的藥物受體,佔所有人類藥物靶標的50%以上,並作為包括癌症在內的多種疾病的治療靶標,包括心血管、代謝、中樞神經系統和炎症性等疾病。

    離子通道代表著另一組重要的膜蛋白藥物靶標,佔目前上市藥物的10%。儘管如此,製備出數量足夠的、純正的、摺疊形式正確的膜受體用於藥物開發仍然是一大挑戰。

    膜蛋白鑑定

    膜蛋白鑑定

    BTP-膜蛋白鑑定服務一般流程:

    1. 從細胞質、周質或細胞培養上清液中純化膜蛋白。根據所使用的表達宿主或表達載體,從細胞質、(細菌)周質或細胞培養上清液中純化蛋白質。
    2. 緩衝液和去汙劑篩選,用於增加溶解度和純化。對於可溶性蛋白和膜蛋白,使用視差掃描熒光法(DSF)確定穩定性最佳的緩衝液的條件。如果適用,建立的活性分析法可用以關聯穩定性和活性狀態。對於膜或膜附著蛋白,在從細菌或真核生物膜中提取蛋白時需要使用去汙劑。去汙劑的使用,需要在提取和純化步驟中針對蛋白質穩定性進行最佳化。如果蛋白質表達為包涵體,完成了再溶解和重摺疊,可對最佳去汙劑和緩衝液條件進行最佳化。
    3. 使用His、Rho1D4、GST或strep標籤進行親和純化。使用我們的高質量親和純化基質可以純化與His,GST或Strep標籤等標籤融合的蛋白質。對於膜蛋白,我們建議使用Rho1D4系統,也可根據需求使用其他標籤進行純化。我司的純化條件進行了最佳化,可根據目標蛋白的不同,可以放大至毫克量的純化。服務可包括緩衝液和去汙劑的最佳化,以提供具有最佳穩定性和活性的蛋白質。百泰派克生物會提供所有步驟的詳盡文件,包括SDS-PAGE和Western Blot等資料。

    進一步純化步驟可用於準備結晶的均一性蛋白質組分。爲了獲得適合於,如蛋白質結晶實驗或功能結合測定的蛋白質,可以使用例如陰離子或陽離子交換色譜或凝膠過濾進行第二或第三純化步驟。

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