小分子蛋白(10KD)WB實驗電泳液中不加SDS,但是wb不就是依靠SDS聚丙烯凝膠電泳的嗎?如果不加SDS,是用tris填平嗎
小分子蛋白(10KD)在進行Western Blot(WB)實驗時,通常確實使用SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。SDS是一種表面活性劑,它的作用是使蛋白質變性並賦予蛋白質負電荷,使蛋白質按照大小進行分離。
如果你在電泳過程中不加SDS,蛋白質將不會完全變性,這意味著蛋白質的電泳遷移不僅受到它們大小的影響,還受到它們的形狀和電荷的影響。這種情況下通常使用的是非變性電泳,或稱為天然電泳。在非變性電泳中,蛋白質保持其原有的結構和電荷特性。
如果不使用SDS,通常會使用Tris-glycine或Tris-acetate緩衝體系,以維持pH值,但這並不會使蛋白質變性或賦予統一的負電荷。因此,如果你的實驗目的是要根據蛋白質的大小進行分離,那麼不建議省略SDS。如果你的實驗目的是保留蛋白質的原始結構和功能,可以考慮使用非變性條件進行電泳。
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