兩個蛋白有互作,加到緩衝液裏共同孵育,緩衝液:蛋白1:蛋白2的體積配比應該是多少
兩個蛋白質進行相互作用實驗時,緩衝液與蛋白質的體積比通常取決於需考慮多個因素,包括蛋白質的濃度、活性、相互作用的型別和強度,以及實驗的特定目的。沒有統一的“一刀切”配比。
一、配比的選擇:
一個常見的起點是使用等摩爾的蛋白質,即蛋白1和蛋白2的摩爾濃度相同。例如,如果兩個蛋白質的分子量相似,可以嘗試按體積1:1混合。
然而,根據兩蛋白之間的互作型別和親和力,可能需要調整這個比例。對於低親和力的互作,可能需要增加一個或兩個蛋白的濃度。
二、緩衝液的體積:
緩衝液的體積應足夠以保持蛋白質穩定,並允許足夠的空間進行互作。通常,蛋白質的總體積不應超過總反應體積的一半。
雖然可以從等摩爾比例或等體積比例開始(例如蛋白1:蛋白2 = 1:1,加入足夠的緩衝液以維持蛋白穩定),但最終的最佳比例需要根據具體的實驗目的和蛋白質的特性來確定,並透過一系列實驗進行驗證和最佳化。
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