請問跑泛素化應該配多大濃度的膠,轉膜的電流大小及時間是多少,以及PVDF膜用0.45還是0.22?
1、凝膠的濃度:
對於大多數蛋白質,使用 8-12% 的SDS-PAGE凝膠是比較常見的。如果目標蛋白較小(<20 kDa)或者非常大(>200 kDa),可能需要使用更高或更低濃度的凝膠。
2、電泳的電流和時間:
通常情況下,電泳的電流設定為常電流(constant current)模式,電流大小一般為 15-25 mA(每個凝膠槽)。電泳時間取決於凝膠的厚度和蛋白的大小,通常在1-2小時之間。
3、PVDF膜的孔徑:
0.45 µm 和 0.22 µm 是兩種常用的PVDF膜孔徑。對於大多數應用,0.45 µm 的孔徑足夠了。如果目標蛋白非常小,使用 0.22 µm 孔徑的膜可以提高蛋白的捕獲效率。
這些引數可能需要根據您的特定實驗條件進行最佳化,建議您參考蛋白質印跡試劑盒的說明書或相關的科學文獻,以獲取最準確的實驗設定。
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