WB跑出來的條帶一片空白,白的發光,是什麼原因呢
Western Blot(WB)實驗中出現的條帶空白且發光(通常指在成像時出現過曝光的現象)可能由以下原因造成:
1、樣品蛋白濃度過高:
如果載入的樣品蛋白濃度過高,可能導致訊號過強,造成條帶處發光。解決方法是稀釋樣品,減少載入量。
2、一抗或二抗濃度過高:
抗體濃度過高會導致非特異性結合,增強背景訊號。應調整抗體的稀釋比例。
3、曝光時間過長:
如果成像時曝光時間過長,可能會導致影象過曝,呈現白色發光。調整曝光時間,避免過度曝光。
4、阻斷不充分:
如果阻斷步驟不充分,可能導致抗體在膜上非特異性結合,增強背景。確保充分並正確地進行阻斷步驟。
5、膜的處理問題:
膜的處理不當(如過度洗滌或乾燥)也可能導致條帶發光。確保遵循正確的膜處理步驟。
通常,透過控制樣本的載入量、抗體的稀釋比例以及成像的曝光時間,可以有效避免此類問題的發生。
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