測定蛋白質中氨基酸含量的主要步驟有哪些?爲什麼一般分析報告顯示17種氨基酸成分?
測定蛋白質中氨基酸含量的主要步驟如下:
1.蛋白質水解:
蛋白質樣品首先經過酸水解(常用6M鹽酸,在高溫下加熱24小時)來將蛋白質分解為單獨的氨基酸。
2.去除雜質:
水解後的樣品可能包含其他非氨基酸的化合物,需要進行淨化,例如透過離子交換柱。
3.衍生化:
某些氨基酸可能需要衍生化,以增加其在分析儀器上的檢測靈敏度。
4.分離和定量:
通常使用液相色譜技術(如HPLC)來分離和定量每個氨基酸。每種氨基酸的峰面積與其濃度成正比。
5.結果解釋:
根據已知標準的峰面積或其他引數,可以確定樣品中每種氨基酸的含量。
至於為什麼一般分析報告顯示17種氨基酸成分,原因是在酸水解過程中,蛋白質中的三種氨基酸(賴氨酸、色氨酸和半胱氨酸/胱氨酸)易於損失或轉化。例如,色氨酸在酸條件下易於降解,而半胱氨酸和胱氨酸在酸水解中會轉化為焦硫酸。
因此,雖然蛋白質由20種標準氨基酸組成,但常規的氨基酸分析技術通常只能檢測到17種。
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