考馬斯亮藍法測蛋白質含量原理
考馬斯亮藍染色法(Coomassie Brilliant Blue staining method)是一種常用於測定蛋白質濃度的方法。其原理基於考馬斯亮藍染料與蛋白質發生可逆結合的特性。當染料與蛋白質結合時,會導致染料的吸光特性發生改變,其最大吸收波長會從465 nm變到595 nm。
在酸性條件下,染料中的磷酸基團會被部分質子化,使染料帶正電,而蛋白質上的氨基酸殘基(特別是精氨酸和賴氨酸)會帶負電。這導致染料與蛋白質之間產生電荷間的吸引力,使得它們結合。
透過在已知蛋白質濃度的標準樣品中構建標準曲線,可以使用分光光度計在595 nm的波長下測量樣品的吸光度,並透過比較標準曲線來估算樣品中的蛋白質濃度。
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