常用的血清蛋白質含量測定方法有哪些
血清是血液中的一部分,去除了紅細胞、白細胞、血小板和凝血因子後的液體部分。血清中包含大量的蛋白質,對於這些蛋白質的定量分析可以採用以下方法:
1.雙硫酸鹽法(BCA Protein Assay):
這是一種受到廣泛使用的、基於銅離子與蛋白質結合後在雙硫酸鹽存在下產生紫色產物的方法。吸光度與蛋白質濃度呈線性關係。
2.Lowry方法:
這是一種老式的、經典的蛋白質測定方法,也是基於銅與蛋白質結合後在Folin-Ciocalteu試劑存在下產生的顏色變化。
3.Bradford蛋白質測定法:
該方法基於Coomassie藍G-250與蛋白質之間的結合。這種結合導致染料從紅棕色轉變為藍色,吸光度的增加與蛋白質濃度呈線性關係。
4.UV吸收法:
蛋白質可以在280nm處吸收紫外光,這主要是因為其中的芳香族氨基酸如酪氨酸和色氨酸。使用這種方法時,需要確保樣品中沒有其他吸收280nm光的物質。
5.免疫測定法:
例如ELISA或其他免疫學方法,可以用於血清中特定蛋白質(如肌酸激酶、轉鐵蛋白等)的測定。
6.電泳方法:
如血清蛋白電泳或SDS-PAGE,可以用於分析血清蛋白質的組成和相對丰度,但通常需要與其他定量方法結合使用。
7.質譜分析:
儘管這是一種更高階和複雜的技術,但它提供了對血清蛋白質深入分析的可能性,特別是在蛋白質組學的研究中。
選擇哪種方法取決於實驗的目的、所需的準確性、靈敏度、樣品處理和分析的時間,以及實驗室的裝置和經驗。對於大多數常規的血清蛋白質測定,BCA、Lowry和Bradford方法都是經濟且有效的選擇。
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