請問有人知道轉錄組動物取樣的步驟嗎?跟代謝組一樣嗎?取好的脂肪組織需要放在PBS中洗去血絲和毛嗎?
轉錄組學和代謝組學的取樣步驟有所不同,因為它們分別旨在分析不同型別的生物分子——轉錄組學分析RNA,而代謝組學分析細胞或組織中的代謝物。儘管兩者都需要高質量的樣本以確保準確的資料分析,但是樣本的處理和儲存方法因分析的目標分子而異。
轉錄組學和代謝組學在動物取樣時的一般考慮因素和步驟如下:
一、轉錄組學:
1.取樣:
取下特定的組織(例如脂肪組織),儘量減少因操縱而造成的應激或其他變化,因為這些可能影響基因表達。
2.清洗:
可以用PBS(磷酸鹽緩衝鹽水)輕輕清洗組織表面的血絲和汙物,但要避免對組織造成機械性損傷。
3.處理:
爲了防止RNA降解,取樣後組織應立即置於適當的RNA穩定劑中(例如RNAlater),或立即透過液氮快速冷凍,然後儲存在-80°C的條件下,直到提取RNA。
二、代謝組學:
1.取樣:
同樣需要取下特定的組織,過程中要快速且減少汙染。
2.清洗:
代謝組學的樣本通常不需要像轉錄組學那樣清洗,因為代謝物分析更關注組織中的化學成分,而非基於RNA的測量。但是,需要根據特定研究的目標和要求來確定。
3.處理:
組織通常需要透過液氮快速冷凍,然後在-80°C下儲存,以保護組織中的代謝物不發生變化,直到進行代謝物提取和分析。
對於脂肪組織來說,如果目標是轉錄組學分析,清除血絲是有必要的,因為血液中的細胞和RNA可以汙染組織樣本,影響後續的RNA提取和基因表達分析。使用PBS清洗組織可以幫助去除血絲和汙染物,但這個步驟應該快速且溫和,以避免損傷組織或改變其基因表達。在處理和儲存樣本時,迅速並且避免RNA降解是至關重要的。
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