10X單細胞測序是不是隻測3'UTR的那部分?
10X單細胞測序技術基於GEM(Gel Bead in EMulsion)技術,將單個細胞與一系列的微滴中的瓊脂糖珠(gel bead)一起封裝在油水混合物中。每個瓊脂糖珠上都有一種特定的條形碼,用於標記來自同一細胞的RNA分子。細胞在微滴中被裂解,RNA與瓊脂糖珠上的條形碼進行反應,形成RNA-條形碼複合物。複合物經過逆轉錄和擴增,生成cDNA,然後進行測序。
10X單細胞測序技術主要關注的是mRNA的轉錄本,而不是特定的區域,如3'UTR。在cDNA合成過程中,使用的是一種稱為oligo-dT的引物,它可以選擇性地逆轉錄mRNA的poly(A)尾部。因此,10X單細胞測序可以捕獲到mRNA的全長,包括5'端、CDS(Coding Sequence)和3'端。
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