S-亞硝基化分析
S-亞硝基化(SNO)是指部分亞硝基(NO)與蛋白質的巰基殘基(S)共價連線形成S-亞硝基。巰基殘基屬於蛋白質中特定半胱氨酸殘基的子集,所得的SNO為S-亞硝基蛋白。SNOs在細胞質中的半衰期很短,因為有許多還原酶(包括谷胱甘肽(GSH)和硫氧還蛋白)會對蛋白質進行去亞硝基化作用。因此,SNOs通常儲存在質膜、囊泡、間質和親脂性蛋白的摺疊中,以保護它們免於被去亞硝基化,例如,介導凋亡的半胱天冬酶(caspases)就以SNO的形式儲存線上粒體膜間空間中。
S-亞硝基化的過程是可逆。去亞硝基化是一種酶催化過程,它逆轉了S-亞硝基化過程。然而,S-亞硝基化不是隨機事件,且僅對特定的半胱氨酸殘基進行S-亞硝基化。S-亞硝基化異常可能導致蛋白質發生錯誤摺疊,突觸損傷和細胞凋亡。SNO訊號功能異常還與許多疾病的發病機制有關,例如阿爾茨海默氏心血管疾病。
S-亞硝基化
由於蛋白質可能包含多個半胱氨酸,以及SNO的不穩定特性,S-亞硝基化的半胱氨酸可能很難檢測到,且很難與非S-亞硝基化的氨基酸區分開。百泰派克生物科技建立了高度靈敏的分析平臺,可以分析真核生物和原核生物中的S-亞硝基化半胱氨酸。此外,我們還最佳化了檢測流程,可提供更快、更敏感的S-亞硝基化半胱氨酸分析服務。
S-亞硝基化分析服務工作一般流程
1. 在凝膠或溶液中水解蛋白質;
2. 使用抗S-亞硝基化半胱氨酸抗體進行S-亞硝基半胱氨酸富集;
3. HPLC分離後進行ESI-TOF MS/MS分析;
4. 質譜資料解析。
技術平臺
離子色譜法
高效液相色譜(HPLC)
基質輔助鐳射解吸電離質譜(MALDI-MS)
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